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胞浆蛋白提取试剂盒图片
产品货号:
QN1066
中文名称:
胞浆蛋白提取试剂盒
英文名称:
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
胞浆蛋白提取试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取胞质蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,作用较为温和,可获得蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验,由于含有上述的酶抑制剂,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。

操作方法:
1、组织总蛋白的提取
(1)在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF;混匀,放置在冰上备用;
(2)称取0.1g的新鲜组织,放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处,用眼科剪将组织块尽可能的剪碎,然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液,研磨直至没有明显的组织块,这个过程注意冰上操作;
(3)将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中,4℃,12000g离心30min;
(4)吸取上清至新的管中;
(5)进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80℃,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)
2、细胞总蛋白的提取
(1)裂解液的用量:107个细胞需要裂解液1ml;
(2)贴壁细胞:弃去培养基,用冷的PBS洗两次,弃去PBS,然后加入计算好的细胞裂解液;
(3)在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞,
(4)将刮离的细胞裂解液移入EP管中,颠倒裂解20-30min
(5)悬浮细胞:4℃400g离心收集细胞,用冷的PBS洗两次细胞,同样按细胞数加入裂解液,
(6)涡旋10s,放置冰上裂解10min,重复3-4次;
(7)裂解完毕之后,将细胞裂解液4℃,12000g离心30min;
(8)将上清移入新的EP管中;
(9)进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80℃,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)

注意事项:
1、实验过程,所有试剂都要需要预冷或者即融,保证操作过程中的低温环境;
2、PSMF(有毒)现用现加,因为PMSF在水溶液中会快速降解。

储存条件 :-20℃
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